PCR இன் போது மாசுபடாமல் இருப்பது எப்படி என்பதற்கான எளிய குறிப்புகள்

பிசிஆர் தொழில்நுட்பம் என்பது நியூக்ளிக் அமிலம் பெருக்க நுட்பமாகும், இது விட்ரோவில் டிஎன்ஏ நகலெடுக்கும் செயல்முறையைப் பிரதிபலிக்கிறது.இது முக்கியமாக மூன்று சுழற்சிகளை மீண்டும் செய்கிறது: அதிக வெப்பநிலை குறைதல், குறைந்த வெப்பநிலை அனீலிங் மற்றும் நீட்டிப்பு, பின்னர் இலக்கு டிஎன்ஏவை மில்லியன் கணக்கான முறை பெருக்குகிறது.எனவே, PCR தொழில்நுட்பம் மிகவும் உணர்திறன் கொண்டதாக இருக்கும் நன்மையைக் கொண்டுள்ளது.இருப்பினும், ஒவ்வொரு நாணயத்திற்கும் இரண்டு பக்கங்கள் உள்ளன, மேலும் PCR தொழில்நுட்பத்தின் மிகப்பெரிய தீமை என்னவென்றால், அது மாசுபாட்டிற்கு மிகவும் எளிதில் பாதிக்கப்படுகிறது, மேலும் மிகக் குறைந்த அளவு மாசுபாடு தவறான நேர்மறைகளுக்கு வழிவகுக்கும்.

ஆய்வக நியூக்ளிக் அமிலம் மாசுபட்டவுடன், சாதாரண சோதனைகள் நிறுத்தப்பட வேண்டும்.மாசுபாட்டின் மூலத்தைக் கண்டறியும் வரை அல்லது ஆய்வகத்தின் தூய்மை தரமானதாக இருக்கும் வரை குறிப்பிடத்தக்க பொருள் மற்றும் மனித வளங்கள் தேவைப்படும்.மேலும், ஆய்வக அறிக்கையை செல்லாததாக்க வேண்டும்.மறு பரிசோதனைக்குப் பிறகுதான் முடிவுகள் நம்பகமானவை.

திறம்பட மாசுபடுவதைத் தவிர்ப்பதற்கும், நிலையான மற்றும் நம்பகமான சோதனை முடிவுகளைப் பெறுவதற்கும், நடைமுறையில் மாசுபாட்டைத் தடுக்க அல்லது அகற்ற சில நடவடிக்கைகளை எடுக்க வேண்டும்.

பிசிஆர் தட்டு

மாசுபாட்டின் ஆதாரங்கள்.
எதிர்வினை மாசுபாடு
வினைப்பொருள் கொள்கலன்களாக, பிசிஆர் ரியாஜெண்டுகளைத் தயாரிக்கும் போது பாத்திரங்கள், நீர் மற்றும் பிற தீர்வுகள் நியூக்ளிக் அமிலங்களால் மாசுபடுத்தப்படலாம்.

உபகரணங்கள் மாசுபாடு
அரை தானியங்கி நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் கருவிகள் மற்றும் முழு தானியங்கி நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் கருவிகள் மாதிரிகள் அல்லது நியூக்ளிக் அமில வார்ப்புருக்கள் பிரித்தெடுக்கும் போது கசிந்து இயந்திரத்தை மாசுபடுத்தும்.அல்லது உபகரணங்களுக்குள் இருக்கும் தொட்டி நன்கு சுத்தம் செய்யப்படாமல், எஞ்சியிருக்கும் திரவம் அல்லது படிகங்கள் ஆவியாகி ஏரோசோல்களை உருவாக்குகின்றன, இது மாசுபாட்டை ஏற்படுத்தும்.

மாதிரி குறுக்கு மாசுபாடு
மாதிரி குறுக்கு-மாசு பல்வேறு காரணிகளால் ஏற்படலாம்: மாதிரி சேகரிப்பு கொள்கலன் மாசுபடுதல்;மாதிரி வைக்கப்படும் போது மோசமான சீல் காரணமாக கொள்கலன் கசிவு;கொள்கலனின் வெளிப்புறத்தில் ஒட்டிக்கொண்ட மாதிரிகள்;காற்றில் உள்ள இன்ஹேலர் மற்றும் ஏரோசோல்களின் மாசுபாடு.குறிப்பாக, வைரஸ்கள் ஏரோசோல்கள் மூலமாகவோ அல்லது ஏரோசோல்களை உருவாக்குவதன் மூலமாகவோ பரவி, பரஸ்பர மாசுபாட்டை ஏற்படுத்தும்.

PCR தயாரிப்பு மாசுபாடு
இது PCR இல் மிகவும் பொதுவான மாசு பிரச்சனையாகும்.பெருக்கத்திற்குப் பிறகு திறக்கும் அல்லது பெருக்கத்திற்குப் பிறகு தயாரிப்பின் முறையற்ற கையாளுதல் தேவைப்படும் மதிப்பீடுகளில் இது பொதுவாகக் காணப்படுகிறது.ஏனெனில் PCR தயாரிப்பின் நகல் அளவு PCR ஆல் கண்டறியப்பட்ட அதிகபட்ச நகல்களை விட அதிகமாக உள்ளது.எனவே, PCR தயாரிப்பு மாசுபாட்டின் மிகச் சிறிய அளவு தவறான நேர்மறையை ஏற்படுத்தும்.

குளோனிங் பிளாஸ்மிட் மாசுபாடு
நேர்மறை குறிப்புகள் பொதுவாக ஆய்வக செயல்பாடுகளில் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, மேலும் இந்த நேர்மறை குறிப்புகளில் பெரும்பாலானவை சில குளோன் செய்யப்பட்ட பிளாஸ்மிட்களிலிருந்து வருகின்றன.ஒரு யூனிட் தொகுதிக்கு குளோன் செய்யப்பட்ட பிளாஸ்மிட்களின் செறிவு மிக அதிகமாக உள்ளது மற்றும் கவனமாகப் பயன்படுத்தாவிட்டால் எளிதில் மாசுபடுத்தப்படும்.

சில ஆய்வகங்கள் அவற்றின் சொந்த பிளாஸ்மிட்களை தரக் கட்டுப்பாட்டு தயாரிப்புகளாக குளோன் செய்கின்றன.இருப்பினும், தயாரித்த பிறகு, கழிவுகள் போதுமான அளவு கண்டிப்பான முறையில் கையாளப்படுவதில்லை, இது பிளாஸ்மிட்களால் ஆய்வகத்தை மாசுபடுத்துவதற்கு வழிவகுக்கிறது, இதனால் மாதிரிகள்.

மாசுபாட்டைக் கட்டுப்படுத்தும் நடவடிக்கைகள்
பரிசோதனைப் பிரிவுப்படுத்தல்
ஆய்வகங்களின் பகுத்தறிவு பிரிப்பு.பின்வரும் படிகளின் செயல்பாட்டைப் பிரிக்கவும் அல்லது பிரிக்கவும்: மாதிரி செயலாக்கம், PCR எதிர்வினை தீர்வு தயாரித்தல், PCR சுழற்சி பெருக்கம், PCR தயாரிப்பு அடையாளம், முதலியன. கூடுதலாக, மாதிரி செயலாக்கம் மற்றும் PCR தயாரிப்பு அடையாளம் ஆகியவற்றிலிருந்து பிரிக்கப்பட வேண்டும் என்பதில் சிறப்பு கவனம் செலுத்தப்பட வேண்டும். மற்ற படிகள்.

அவற்றைப் பிரிப்பது சிறந்தது: மாதிரி செயலாக்கப் பகுதி, PCR எதிர்வினை தீர்வுத் தயாரிப்பு பகுதி, PCR சுழற்சி பெருக்கப் பகுதி மற்றும் PCR தயாரிப்பு அடையாளப் பகுதி.அவற்றின் ஆய்வகப் பொருட்கள் மற்றும் ஆஸ்பிரேட்டர்கள் பிரத்தியேகமாகப் பயன்படுத்தப்பட வேண்டும்.

ஆய்வகத்தில் பயன்படுத்தப்படும் புற ஊதா, எஞ்சிய டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏவை அழிக்க பரிசோதனைக்கு முன் கிருமி நீக்கம் செய்யப்பட வேண்டும்.

ஒவ்வொரு மண்டலத்திற்கும் உள்ள கட்டுரைகள் கலக்கப்படக்கூடாது
ஒவ்வொரு ஆய்வகப் பகுதியும் வெவ்வேறு வேலைப் பகுதிகளைச் சேர்ந்த கருவிகள் மற்றும் கட்டுரைகளைக் கலப்பதைத் தவிர்க்க, தெளிவான வண்ணத்தில் வெவ்வேறு உபகரணங்கள் மற்றும் கட்டுரைகளால் தெளிவாகக் குறிக்கப்பட வேண்டும்.உதாரணமாக, வேலை செய்யும் உடைகள், வேலை செய்யும் காலணிகள், குப்பைத் தொட்டிகள், மாப்ஸ், கந்தல்கள், பேனாக்கள் போன்றவை ஒவ்வொரு பகுதியிலும் பிரத்தியேகமாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.

டிஸ்போசபிள் பைப்பெட் டிப்ஸ், சென்ட்ரிஃப்யூஜ் டியூப்கள், தூசி இல்லாத கையுறைகள், முகமூடிகள் போன்றவற்றைப் பயன்படுத்தவும்.

நிலையான ஏர் கண்டிஷனிங் மற்றும் காற்றோட்டம் அமைப்பை நிறுவவும்
முடிந்தவரை முழு டெலிவரி மற்றும் எக்ஸாஸ்ட் ஏர் கண்டிஷனிங் சிஸ்டம்ஸ் ஏர் கண்டிஷனிங் சிஸ்டம்களைப் பயன்படுத்தவும்.ஒவ்வொரு செயல்பாட்டு பகுதிக்கும் அணுகலின் போது கண்டிப்பான ஒற்றை ஓட்டம் திசை தேவைப்படுகிறது, அதாவது வினைப்பொருள் தயாரிப்பு மற்றும் சேமிப்பு பகுதி → மாதிரி தயாரிப்பு பகுதி → PCR பெருக்க பகுதி → பெருக்க தயாரிப்பு பகுப்பாய்வு பகுதி, பிற்போக்கு ஓட்டம் இல்லாமல்.

மாசு கண்காணிப்பு
பின்வரும் நடவடிக்கைகளை மேற்கொள்வதன் மூலம் மாசு கண்காணிப்பு மேற்கொள்ளப்படுகிறது: நேர்மறை மற்றும் எதிர்மறை கட்டுப்பாடுகளை நிறுவுதல், மீண்டும் மீண்டும் சோதனைகள், PCR பெருக்கத்திற்காக வெவ்வேறு பகுதிகளுக்கான ப்ரைமர்களைத் தேர்ந்தெடுப்பது போன்றவை. இதனால் மாசுபடுவதைத் தடுக்கவும் அகற்றவும் நடவடிக்கை எடுக்கப்படுகிறது.

வழக்கமான ஆய்வக சுத்தம்
உபகரணங்களின் மேற்பரப்புகள், கவுண்டர்டாப்புகள், தளங்கள், கட்டுரைப் பரப்புகள், பாஸ் பெட்டிகள், கதவுகள் மற்றும் ஜன்னல்களைத் துடைக்க, மற்றும் உபகரணங்களுக்குள் குப்பைத் தொட்டிகளை ஊறவைக்க, 0.5% செயலில் உள்ள குளோரின் கொண்ட கிருமிநாசினி கரைசலை தயார் செய்யவும்.

ஆல்கஹாலுக்கு காற்று தெளித்தல் மேல்-கீழ், உள்ளே-வெளியே கொள்கையின்படி செய்யப்படுகிறது.

பைப்பெட்டுகள், எட்டு குழாய் மையவிலக்குகள், மிக்சர் ஷேக்கர்கள் மற்றும் பிற சிறிய உபகரணங்களை ஆல்கஹால் (75%) மூலம் துடைக்கவும்.

உபகரணங்களின் மேற்பரப்புகள், கவுண்டர்டாப்புகள் மற்றும் தளங்களை சுத்திகரிக்கப்பட்ட நீரில் துடைக்கவும் மற்றும் உபகரண கழிவு தொட்டிகளை சுத்திகரிக்கப்பட்ட தண்ணீரில் துவைக்கவும்.

www.DeepL.com/Translator உடன் மொழிபெயர்க்கப்பட்டது (இலவச பதிப்பு)