நிகழ்நேர ஃப்ளோரசன்ஸ் அளவு Pcr கொள்கை நுட்பங்கள் மற்றும் பயன்பாடுகள்

பொதுவாக, ஃப்ளோரசன்ஸ் பெருக்க வளைவை மூன்று கட்டங்களாகப் பிரிக்கலாம்: ஃப்ளோரசன்ஸ் பின்னணி சமிக்ஞை கட்டம், ஒளிரும் சமிக்ஞை அதிவேக பெருக்க கட்டம் மற்றும் பீடபூமி கட்டம்.பின்னணி சமிக்ஞை கட்டத்தில், ஃப்ளோரசன்ஸின் பின்னணி சமிக்ஞையால் பெருக்கப்பட்ட ஒளிரும் சமிக்ஞை மறைக்கப்படுகிறது மற்றும் தயாரிப்பு அளவு மாற்றங்களை தீர்மானிக்க முடியாது.பீடபூமி கட்டத்தில், பெருக்க தயாரிப்பு இனி அதிவேகமாக அதிகரிக்காது, இறுதி தயாரிப்புத் தொகைக்கும் தொடக்க டெம்ப்ளேட் தொகைக்கும் இடையே நேரியல் தொடர்பு இல்லை, மேலும் இறுதி PCR தயாரிப்புத் தொகையின் அடிப்படையில் தொடக்க DNA நகல் எண்ணைக் கணக்கிட முடியாது.ஃப்ளோரசன்ட் சிக்னலின் அதிவேக பெருக்க கட்டத்தில் மட்டுமே PCR தயாரிப்புத் தொகையின் மடக்கைக்கும் தொடக்க டெம்ப்ளேட் தொகைக்கும் இடையே நேரியல் தொடர்பு உள்ளது, மேலும் இந்த கட்டத்தில் இதை அளவிடுவதற்கு நாம் தேர்வு செய்யலாம்.அளவீடு மற்றும் ஒப்பீட்டின் வசதிக்காக, நிகழ்நேர ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR நுட்பத்தில் இரண்டு மிக முக்கியமான கருத்துக்கள் அறிமுகப்படுத்தப்பட்டுள்ளன: ஃப்ளோரசன்ஸ் வாசல் மற்றும் CT மதிப்பு.

வாசல் என்பது ஒளிரும் பெருக்க வளைவில் செயற்கையாக அமைக்கப்பட்ட மதிப்பாகும்.PCR பெருக்கத்தின் அதிவேக கட்டம்.

Ct மதிப்பு: ஒவ்வொரு எதிர்வினைக் குழாயிலும் உள்ள ஃப்ளோரசன் சிக்னல் செட் டொமைன் மதிப்பை அடையும் சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கை.

Ct மதிப்புக்கும் தொடக்க டெம்ப்ளேட்டிற்கும் இடையிலான உறவு: ஒவ்வொரு டெம்ப்ளேட்டின் Ct மதிப்பும் அந்த டெம்ப்ளேட்டின் தொடக்க நகல் எண்ணின் மடக்கையுடன் நேரியல் உறவைக் கொண்டிருப்பதை ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன, தொடக்க நகல் எண்ணின் அதிக நகல்கள், சிறிய Ct மதிப்பு.Ct மதிப்புகள் ஒப்பீட்டளவில் நிலையானவை.அறியப்பட்ட தொடக்க நகல் எண்ணுடன் ஒரு நிலையான வளைவை உருவாக்கலாம், அங்கு கிடைமட்ட ஒருங்கிணைப்பு தொடக்க நகல் எண்ணின் மடக்கைக் குறிக்கிறது மற்றும் செங்குத்து ஒருங்கிணைப்பு கீழே உள்ள படத்தில் காட்டப்பட்டுள்ளபடி Ct மதிப்பைக் குறிக்கிறது.

எனவே, தெரியாத மாதிரியின் Ct மதிப்பைப் பெறுவதன் மூலம், அந்த மாதிரியின் தொடக்க நகல் எண்ணை நிலையான வளைவில் இருந்து கணக்கிடலாம்.

Ct மதிப்பு நிலையானது அல்ல, வெவ்வேறு மாதிரிகள் மற்றும் வெவ்வேறு கருவிகளால் பாதிக்கப்படலாம், அதே மாதிரியை ஒரே கருவியில் 2 முறை மீண்டும் மீண்டும் செய்தாலும், Ct மதிப்பு மாறுபடலாம்.

அளவு ஒளிரும் மதிப்பீடுகள்: அளவு ஒளிரும் மதிப்பீடுகள் பயன்படுத்தப்படும் குறிப்பான்களைப் பொறுத்து ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வுகள் மற்றும் ஃப்ளோரசன்ட் சாயங்களாகப் பிரிக்கலாம்.ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வுகளில் பீக்கான் தொழில்நுட்பம் (மூலக்கூறு பீக்கான் தொழில்நுட்பம், அமெரிக்கன் டாகியால் பிரதிநிதித்துவம் செய்யப்பட்டது), டாக்மான் ஆய்வுகள் (ஏபிஐ பிரதிநிதித்துவப்படுத்துகிறது) மற்றும் ஃப்ரீட் தொழில்நுட்பம் (ரோச் பிரதிநிதித்துவம்);ஃப்ளோரசன்ட் சாயங்களில் நிறைவுற்ற ஃப்ளோரசன்ட் சாயங்கள் மற்றும் நிறைவுற்ற ஃப்ளோரசன்ட் சாயங்கள் அடங்கும், நிறைவுற்ற ஃப்ளோரசன்ட் சாயங்களின் பொதுவான பிரதிநிதி SYBRGreen I ஆகும், இது இப்போது பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது;நிறைவுற்ற ஃப்ளோரசன்ட் சாயங்களின் பொதுவான பிரதிநிதி SYBRGreenⅠ;நிறைவுற்ற ஒளிரும் சாயங்கள் EvaGreen, LCGreen போன்றவை.

SYBRGreenI என்பது ஃப்ளோரசன்ட் பிசிஆருக்கு பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் டிஎன்ஏ பிணைப்பு சாயமாகும், இது குறிப்பாக இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவுடன் பிணைக்கிறது.அதன் இலவச நிலையில், SYBRGreenI ஒரு பலவீனமான ஒளிரும் தன்மையை வெளியிடுகிறது, ஆனால் ஒருமுறை இரட்டை இழைகள் கொண்ட DNA உடன் பிணைக்கப்பட்டால், அதன் ஒளிரும் தன்மை 1000 மடங்கு அதிகரிக்கிறது.எனவே, ஒரு வினையால் வெளிப்படும் மொத்த ஒளிரும் சமிக்ஞை இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவின் அளவிற்கு விகிதாசாரமாகும் மற்றும் பெருக்க தயாரிப்பு அதிகரிக்கும் போது அதிகரிக்கிறது.

இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏ பிணைப்பு சாயங்களின் நன்மைகள்: எளிமையான சோதனை வடிவமைப்பு, 2 ப்ரைமர்கள் மட்டுமே தேவை, ஆய்வுகளை வடிவமைக்க வேண்டிய அவசியமில்லை, பல மரபணுக்களின் விரைவான சோதனைக்கு பல ஆய்வுகளை வடிவமைக்க வேண்டிய அவசியமில்லை, உருகும் புள்ளி வளைவு பகுப்பாய்வு செய்யும் திறன், தனித்தன்மையை சோதித்தல் பெருக்க எதிர்வினை, குறைந்த ஆரம்ப செலவு, நல்ல பொதுத்தன்மை மற்றும் எனவே உள்நாட்டிலும் வெளிநாட்டிலும் ஆராய்ச்சியில் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.

ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வு முறை (தக்மான் நுட்பம்): PCR பெருக்கம் செய்யப்படும்போது, ​​குறிப்பிட்ட ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வுடன் ஒரு ஜோடி ப்ரைமர்கள் சேர்க்கப்படும்.ஆய்வு அப்படியே இருக்கும்போது, ​​நிருபர் குழுவால் வெளியிடப்படும் ஒளிரும் சமிக்ஞை அணைக்கப்பட்ட குழுவால் உறிஞ்சப்படுகிறது மற்றும் PCR கருவியால் கண்டறியப்படாது;PCR பெருக்கத்தின் போது (நீட்டிப்பு கட்டத்தில்), Taq நொதியின் 5'-3' பிளவு செயல்பாடு ஆய்வை நொதியாக சிதைக்கிறது, இது நிருபர் ஃப்ளோரசன்ஸ் குழு மற்றும் தணிந்த ஃப்ளோரசன்ஸ் குழுவை உருவாக்குகிறது.

ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR இன் பயன்பாடுகள்.

மூலக்கூறு உயிரியல் ஆராய்ச்சி:

1. அளவு நியூக்ளிக் அமில பகுப்பாய்வு.தொற்று நோய்களின் அளவு மற்றும் தரமான பகுப்பாய்வு, சமீபத்திய இன்ஃப்ளூயன்ஸா A (H1N1) தொற்றுநோய் போன்ற நோய்க்கிருமி நுண்ணுயிரிகள் அல்லது வைரஸ்களைக் கண்டறிதல், மரபணு மாற்று தாவரங்கள் மற்றும் விலங்குகளின் மரபணு நகல் எண்களைக் கண்டறிதல், RNAi மரபணு செயலிழக்க விகிதங்களைக் கண்டறிதல் போன்றவை.

2. வேறுபட்ட மரபணு வெளிப்பாடு பகுப்பாய்வு.சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட மாதிரிகளுக்கு இடையிலான மரபணு வெளிப்பாடு வேறுபாடுகளின் ஒப்பீடு (எ.கா. மருந்து சிகிச்சை, உடல் சிகிச்சை, இரசாயன சிகிச்சை, முதலியன), வெவ்வேறு கட்டங்களில் குறிப்பிட்ட மரபணுக்களின் வெளிப்பாடு வேறுபாடுகள் மற்றும் சிடிஎன்ஏ மைக்ரோஅரே அல்லது வேறுபட்ட வெளிப்பாடு முடிவுகளை உறுதிப்படுத்துதல்

3. SNP கண்டறிதல்.ஒற்றை நியூக்ளியோடைடு பாலிமார்பிஸங்களைக் கண்டறிவது வெவ்வேறு நோய்களுக்கு தனிப்பட்ட பாதிப்பு அல்லது குறிப்பிட்ட மருந்துகளுக்கு தனிப்பட்ட பதிலைப் பற்றிய ஆய்வுக்கு முக்கியமானது, மேலும் மூலக்கூறு பீக்கான்களின் தனித்துவமான கட்டமைப்பின் காரணமாக, ஒரு SNP இன் வரிசை தகவல் தெரிந்தவுடன், அது எளிதானது மற்றும் துல்லியமானது. உயர்-செயல்திறன் SNP கண்டறிதலுக்கு இந்த நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தவும்.

4. மெத்திலேஷன் கண்டறிதல்.மெத்திலேஷன் பல மனித நோய்களுடன் தொடர்புடையது, குறிப்பாக புற்றுநோய், மேலும் மெத்திலேட்டட் மற்றும் அன்மெதிலேட்டட் டிஎன்ஏவை வேறுபடுத்துவதற்கு குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள் மற்றும் தக்மான் ஆய்வுகளைப் பயன்படுத்தி மெத்திலேட்டட் சைட்டோசின் யூராசிலாக மாறுவதற்கும், மெத்திலேட்டட் சைட்டோசின் பாதிக்கப்படாதவாறும் டிஎன்ஏவைப் பெருக்குவதற்கு முன் மெத்திலைட் எனப்படும் நுட்பத்தை லேர்ட் அறிவித்தார். .அதிக உணர்திறன்.

மருத்துவ ஆராய்ச்சி:

1. மகப்பேறுக்கு முற்பட்ட நோயறிதல்: மாற்றப்பட்ட மரபணுப் பொருட்களால் ஏற்படும் பரம்பரை நோய்களுக்கு மக்கள் சிகிச்சையளிக்க முடியாது, மேலும் பல்வேறு பரம்பரை நோய்கள் ஏற்படுவதைத் தடுக்க, மகப்பேறுக்கு முந்திய கண்காணிப்பு மூலம் பிறக்கும் நோய்வாய்ப்பட்ட குழந்தைகளின் எண்ணிக்கையை மட்டுமே குறைக்க முடியும்.இது கர்ப்பிணிப் பெண்களால் எளிதில் ஏற்றுக்கொள்ளக்கூடிய ஆக்கிரமிப்பு இல்லாத முறையாகும்.

2. நோய்க்கிருமி கண்டறிதல்: ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR மதிப்பீடு கோனோகாக்கஸ், கிளமிடியா டிராக்கோமாடிஸ், மைக்கோபிளாஸ்மா சோலியம், மனித பாப்பிலோமா வைரஸ், ஹெர்பெஸ் சிம்ப்ளக்ஸ் வைரஸ், மனித நோயெதிர்ப்பு குறைபாடு வைரஸ், ஹெபடைடிஸ் வைரஸ், இன்ஃப்ளூயன்ஸா டியூப், இன்ஃப்ளூயன்ஸா வைரஸ், மைர்கோபாக்டொம் வைரஸ், மைர்கோபாக்டொம் வைரஸ், பிசிஆர்.இது பாரம்பரிய சோதனை முறைகளுடன் ஒப்பிடும்போது அதிக உணர்திறன், குறைந்த மாதிரி அளவு, வேகம் மற்றும் எளிமை ஆகியவற்றின் நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது.

3. மருந்து செயல்திறன் மதிப்பீடு: ஹெபடைடிஸ் பி வைரஸ் (HBV) மற்றும் ஹெபடைடிஸ் சி வைரஸ் (HCV) ஆகியவற்றின் அளவு பகுப்பாய்வு வைரஸ் சுமைக்கும் சில மருந்துகளின் செயல்திறனுக்கும் இடையிலான உறவைக் காட்டுகிறது.லாமிவுடின் சிகிச்சையின் போது HBV-DNA இன் சீரம் அளவு குறைந்து, மீண்டும் அதிகரித்தால் அல்லது முந்தைய அளவை விட அதிகமாக இருந்தால், அது வைரஸ் பிறழ்வைக் குறிக்கிறது.

4. ஆன்கோஜெனடிக் சோதனை: கட்டி வளர்ச்சியின் வழிமுறை இன்னும் தெளிவாக இல்லை என்றாலும், தொடர்புடைய மரபணுக்களில் ஏற்படும் பிறழ்வுகள் புற்றுநோயியல் மாற்றத்திற்கான அடிப்படைக் காரணம் என்று பரவலாக ஏற்றுக்கொள்ளப்படுகிறது.பல கட்டிகளின் ஆரம்ப நிலைகளில் ஆன்கோஜீன்களின் வெளிப்பாடு மற்றும் பிறழ்வு அதிகரிப்பதைக் காணலாம்.நிகழ்நேர ஃப்ளோரசன்ஸின் அளவு PCR ஆனது மரபணுக்களில் உள்ள பிறழ்வுகளைக் கண்டறிவதில் பயனுள்ளதாக இருப்பது மட்டுமல்லாமல், புற்றுநோய்களின் வெளிப்பாட்டையும் துல்லியமாகக் கண்டறிய முடியும்.டெலோமரேஸ் hTERT மரபணு, நாள்பட்ட கிரானுலோசைடிக் லுகேமியா WT1 மரபணு, புற்றுநோயியல் ER மரபணு, புரோஸ்டேட் புற்றுநோய் PSM மரபணு மற்றும் கட்டியுடன் தொடர்புடைய வைரஸ் மரபணுக்கள் உள்ளிட்ட பல்வேறு மரபணுக்களின் வெளிப்பாட்டைக் கண்டறிய இந்த முறை பயன்படுத்தப்படுகிறது.

www.DeepL.com/Translator உடன் மொழிபெயர்க்கப்பட்டது (இலவச பதிப்பு)