அடிக்கடி கேட்கப்படும் செல் கலாச்சார கேள்விகள்

2. மீட்புக்காக திரவ நைட்ரஜனில் இருந்து செல்களை அகற்றும்போது என்ன பாதுகாப்பு நடவடிக்கைகள் எடுக்கப்பட வேண்டும்?

திரவ நைட்ரஜனில் உள்ள செல் கிரையோட்யூப்கள் முற்றிலும் சீல் செய்யப்படாத மற்றும் திரவ நைட்ரஜனை அவற்றில் கசியும் போது, ​​கிரையோட்யூப்பின் வெப்பநிலை கடுமையாக உயர்ந்தால் வெடிப்பை ஏற்படுத்தும்.எனவே திரவ நைட்ரஜனில் இருந்து செல்களை அகற்றும் போது கண்ணாடிகள் மற்றும் பாதுகாப்பு கையுறைகள் அணிய பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.புத்துயிர் பெற, உறைபனிக் குழாயை 37 டிகிரி செல்சியஸ் தண்ணீர் குளியலில் தொடர்ந்து அசைத்து, உறைநிலைக் கரைசலை 1-2 நிமிடங்களுக்குள் முழுமையாகக் கரைக்க வேண்டும்.பிறகு, குழாயின் வெளிப்புறத்தை ஆல்கஹால் துடைப்பால் துடைத்து, பின்னர் அதை அல்ட்ரா-க்ளீன் டேபிளில் எடுத்து செல்களை ஒரு மையவிலக்கு குழாய்க்கு மாற்றவும், அதில் 10 மில்லி கல்ச்சர் மீடியம் சேர்க்கப்பட்டு, 5-10 நிமிடங்களுக்கு 1000 ஆர்பிஎம்மில் மையவிலக்கு செய்து, நிராகரிக்கவும். சூப்பர்நேட்டன்ட், சரியான அளவு கலாச்சார ஊடகத்தைச் சேர்த்து, கலாச்சார குடுவையை தடுப்பூசி போட்டு, 5% CO2 இன்குபேட்டரில் அடைகாக்கவும்.

3. செல்களை திரவ நிலையில் சேமிக்காமல், திரவ நைட்ரஜன் தொட்டியின் நீராவி கட்டத்தில் ஏன் சேமிக்க வேண்டும்?

திரவ நைட்ரஜனின் வாயு கட்டத்தில் சேமிக்கப்படும் செல்கள் புத்துயிர் பெறுவதற்கான வாய்ப்புகள் அதிகம்.திரவ நைட்ரஜனின் திரவ கட்டத்தில், லியோபிலிசேஷன் குழாய்கள் சரியாக மூடப்படாவிட்டால் அல்லது கசிவுகள் இருந்தால், செல்கள் மற்றும் திரவ நைட்ரஜனுக்கு இடையே உள்ள நேரடி தொடர்பு, கரைந்த பிறகு உயிரணுக்களின் நம்பகத்தன்மையை சமரசம் செய்யலாம்.

4. சஸ்பென்ஷன் கலங்களுக்கு, கலாச்சார ஊடகத்தை எப்படி மாற்றுவது?

சஸ்பென்ஷன் செல்களை வளர்ப்பது, புதிய ஊடகத்தைச் சேர்ப்பதன் மூலமோ (இடம் அனுமதித்தால்) அல்லது பழைய ஊடகத்திலிருந்து செல்களை மையவிலக்கு (5 நிமிடங்களுக்கு 100 xg) பிரித்தெடுப்பதன் மூலமும், அதன் பின்னர் புதிய ஊடகத்தில் வீழ்படிந்த செல்களை மீண்டும் இணைத்ததன் மூலமும் செய்யலாம்.இருப்பினும், பெரும்பாலான இடைநீக்க செல் கோடுகளுக்கு, நடுத்தரத்தைச் சேர்ப்பது ஒரு சிறந்த முறையாகும்.எப்படியிருந்தாலும், செல்கள் அவற்றின் மிகப்பெரிய செறிவூட்டல் அடர்த்தியை அடைவதற்கு முன்பு ஊடகம் புதுப்பிக்கப்பட வேண்டும்.செல்களின் செறிவு அடர்த்தி 3 x 10 5 மற்றும் 2 x 10 6 வரை செல் கோடு மற்றும் கலாச்சார நிலைமைகளைப் பொறுத்து மாறுபடும் (ஓய்வு அல்லது கிளறல், ஆக்ஸிஜனேற்ற நிலைகள் போன்றவை).செல்கள் மடக்கை வளர வைக்க போதுமான ஊட்டச்சத்து மீட்பு அனுமதிக்க செல்கள் குறைந்த செல் செறிவு நீர்த்த வேண்டும்.செல் அடர்த்தியைக் குறைக்காமல் ஊடகத்தை வெறுமனே மாற்றினால், செல்கள் ஊடகத்தை விரைவாகக் குறைத்து இறக்கும்.செல்கள் அவற்றின் மிகச்சிறிய அடர்த்திக்குக் கீழே நீர்த்தப்பட்டால், அவை பின்னடைவு கட்டத்தில் நுழைந்து மிக மெதுவாக வளரும் அல்லது இறந்துவிடும்.ஒவ்வொரு சஸ்பென்ஷன் செல் லைனுக்கும் வெவ்வேறு செறிவூட்டல் அடர்த்தி மற்றும் கடந்து செல்லும் இடைவெளி உள்ளது, எனவே தினசரி செல் எண்ணிக்கையே இடைநீக்க செல் கோடுகளை கண்காணிக்கும்*.

5. செல் கலாச்சாரத்திற்கு பரிந்துரைக்கப்படும் CO2 அளவு என்ன?

செல் வளர்ப்பு அமைப்புகளில் CO2 அளவுகள் 0.03% முதல் 40% வரை (பொதுவாக வளிமண்டலத்தில் 0.03% CO2) இருந்தாலும், காற்றில் CO2 சேர்க்கப்படாமல் இருப்பது அல்லது 5% முதல் 10% வரை CO2 செறிவு இருப்பது மிகவும் பொதுவானது.வாயு கட்டத்தில் CO2 அளவுடன் சமநிலைப்படுத்துவதற்கு ஊடகத்தில் சோடியம் பைகார்பனேட்டின் செறிவை சரிசெய்வது முக்கியம்.செல்கள் CO2 ஐ உருவாக்குகின்றன மற்றும் வளர்ச்சி மற்றும் உயிர்வாழ்வதற்கு ஒரு சிறிய அளவு கார்போனிக் அமிலம் தேவைப்படுகிறது.CO2 சேர்க்கப்படாவிட்டால் மற்றும் செல்கள் பெருகும் பட்சத்தில், 4 mM (0.34 g/L) நீரற்ற சோடியம் பைகார்பனேட்டைப் பயன்படுத்தலாம்.இருப்பினும், கலாச்சார குடுவையின் மூடியை இந்த கட்டத்தில் இறுக்க வேண்டும்.கலாச்சார அமைப்புக்கு 5% அல்லது 10% CO2 தேவைப்பட்டால், 23.5 mM (1.97 g/L) அல்லது 47 mM (3.95 g/L) சோடியம் பைகார்பனேட்டை முறையே 37 ° C இல் பயன்படுத்தவும், ஆரம்ப pH தோராயமாக 7.6.இந்த நிலைமைகளின் கீழ், குடுவை மூடப்படாமல் விடப்பட வேண்டும் அல்லது வாயு சமநிலையை பராமரிக்க பெட்ரி டிஷ் பயன்படுத்தப்பட வேண்டும்.

6. சில செல்களுக்கு சோடியம் பைருவேட் ஏன் தேவைப்படுகிறது?நான் எவ்வளவு சோடியம் பைருவேட்டை நடுத்தரத்துடன் சேர்க்க வேண்டும்?

பைருவேட் என்பது கிளைகோலைடிக் பாதையில் உள்ள ஒரு கரிம அமில வளர்சிதை மாற்றமாகும், இது செல்லுக்குள் உடனடியாக நுழைந்து வெளியேறுகிறது.எனவே, சோடியம் பைருவேட்டை ஊடகத்தில் சேர்ப்பது ஆற்றல் மூலமாகவும், உட்சேர்க்கைக்கான கார்பன் மூலமாகவும், சில குறிப்பிட்ட செல்களைப் பராமரிக்க உதவுகிறது, செல் குளோனிங்கிற்கு உதவுகிறது அல்லது ஊடகத்தில் சீரம் செறிவு குறையும் போது தேவைப்படுகிறது.சோடியம் பைருவேட் ஃப்ளோரசன்ஸால் தூண்டப்பட்ட சைட்டோடாக்சிசிட்டியைக் குறைக்கவும் உதவுகிறது.சோடியம் பைருவேட் பொதுவாக 1 mM இறுதி செறிவில் சேர்க்கப்படுகிறது.வணிகரீதியில் கிடைக்கும் சோடியம் பைருவேட் கரைசல்கள் பொதுவாக 100 mM சேமிப்பு தீர்வு (100X) ஆகும்.

www.DeepL.com/Translator (இலவச பதிப்பு) மூலம் மொழிபெயர்க்கப்பட்டது.